Mai multe enzime utilizate în mod obișnuit în experimentele PCR

Reacția în lanț a polimerazei, prescurtată caPCRîn engleză, este o tehnică de biologie moleculară utilizată pentru amplificarea fragmentelor specifice de ADN.Poate fi privit ca o replicare specială a ADN-ului în afara corpului, care poate crește foarte mult o cantitate foarte mică de ADN.Pe tot parcursulPCRproces de reacție, o clasă de substanțe joacă un rol vital – enzimele.

1. Taq ADN

În experimentele din primele zile alePCR, oamenii de știință au folosit Escherichia coli ADN polimeraza I, dar există o problemă cu această enzimă: trebuie să reînnoiască enzimă de fiecare dată când se efectuează un ciclu, ceea ce face ca etapele operației să fie ușor complicate și este dificil să se amplifice complet automat.Această problemă a fost rezolvată după ce oamenii de știință au izolat accidental ADN polimeraza Taq din Thermus aquaticus în 1988. De atunci, amplificarea automată a ADN-ului a devenit o realitate.Descoperirea acestei enzime face, de asemeneaPCRtehnologie o tehnologie convenabilă, practică și universală.În prezent, Taq ADN polimeraza este cea mai comună polimerază din trusele ADN.

2. PfuDNA

După cum s-a menționat mai sus, Taq DNase are un bug mare, așa că oamenii de știință au modificat Taq DNA polimeraza într-o anumită măsură pentru a evita amplificarea nespecifică din cauza nepotrivirii, rezultând rezultate inexacte ale testelor.Dar modificarea ADN polimerazei Taq poate inhiba activitatea ADN polimerazei la temperatura camerei.Polimeraza PfuDNA poate compensa bine dezavantajele de mai sus ale polimerazei Taq ADN, astfel încât reacția PCR poate fi efectuată în mod normal, iar rata de succes a amplificării genei țintă poate fi îmbunătățită în mod eficient.

3. Reverse Transcriptaza

Reverse transcriptaza a fost descoperită în 1970. Această enzimă folosește ARN ca șablon, dNTP ca substrat, urmează principiul împerecherii bazelor și sintetizează o singură catenă ADN complementară șablonului ARN în direcția 5′-3′.Transcriptaza inversă este dependentă în primul rând de activitatea ADN polimerazei din matrițele ADN sau ARN și, prin urmare, nu are activitate exonuclează 3′-5′.Cu toate acestea, are activitate RNază H, care limitează lungimea sintezei revers transcriptazei într-o anumită măsură.Datorită fidelității scăzute și termostabilității transcriptazei inverse sălbatice, oamenii de știință au modificat-o și ele.

PentruPCRexperimente, principalele consumabile sunt: ​​tub PCR individual, tub PCR cu 4/8 benzi, plăci PCR.

a lui Labioconsumabile PCRau urmatoareleavantaje:

plăci PCR: Compatibilitate largă cu termociclor;Contrast ridicat, identificare ușoară a puțurilor;reflecție fluorescentă bine; buntransfer de căldură;Inhibitori certificati de DNază, RNază, ADN, PCR și testat fără pirogeni.

Tuburi PCR individuale: Rezistent la evaporare; buntransfer de căldură;claritate optică excelentă; DNază certificată, RNază, ADN, inhibitori PCR și testat fără pirogeni.

Tuburi PCR cu 4/8 benzi: Pereți ultra-subțiri; claritate ridicată; reflexie bună a fluorescenței;poate fi utilizat în industria farmaceutică, industria alimentară și biologia moleculară; material PP virgin de înaltă calitate; DNază certificată, RNază, ADN, inhibitori PCR și testat fără pirogeni.